Deutscher Kaiser 1576-1612, führte auf dem Prager Hradschin ein menschenscheues Leben und galt als Sonderling, der sein weltabgewandtes Dasein weitgehend den magischen Künsten widmete. Sein besonderes Interesse galt der Astrologie und Alchemie, des weiteren seinen Sammlungen von Kunstgegenständen und Kuriositäten. Von politischen Entscheidungen hielt er sich fern, vielleicht deshalb, um nicht durch aktives Eingreifen kriegerische Verwicklungen zwischen Katholizismus und Reformation herbeizuführen. An seinem Hofe wirkten unter anderem der Astrologe und Alchemist Thaddaeus Hagecius ab Hagek, Verfasser der »Commentaria in aphorismos Hermetis«, ein Alchemist und Magier namens Scotto oder Scotus, der jüdische Astronom und Historiker David Gans. Rudolf war überdies in Kontakt mit Sendivogius, John Dee und Kelley, mit Kepler und Tycho de Brahe und wahrscheinl. auch mit Rabbi Jehuda Löw ben Besalel. Sein Leibarzt war Michael Majer. Auf Rudolfs Anordnung wurde für 700.000 Taler die österreichische Hauskrone angefertigt welche ab 1804 als Kaiserkrone verwendet wurde.
»Als Kuriosa sind heute noch in der Wiener Hofbibliothek zwei Alraunen erhalten, die als Männchen und Weibchen gekleidet sind«, nach Hansmann/KrissRettenbeck 1977, was entweder auf die Sitte des Exotica- und Kuriosasammelns oder auf einen echten Glauben an die Wirksamkeit der »Alräunchen« hinweist. In seinen letzten Lebensjahren scheint Rudolf unter Melancholie gelitten zu haben und verzichtete 1608 auf die Führung der Regierungsgeschäfte.