Ein Tier, das lange Zeit mit der Schattenseite des Aberglaubens, insbesondere mit der Hexerei und dem Teufel in Zusammenhang gebracht wurde. Mit ihren nächtlichen Flügen und der Gewohnheit, sich ihre Ruheplätze an verlassenen Orten wie in Ruinen und Höhlen zu suchen, haben Fledermäuse stets Furcht erweckt. Viele Kulturen verbinden sie mit dem Bösen und dem Tod, und die Menschen sprachen einst automatisch schützende Zaubersprüche, wenn eine Fledermaus über sie hinwegflog.
Vormals war der Glaube weit verbreitet, Hexen besässen die Macht, sich in Fledermäuse zu verwandeln. Somit galt es auch als grosses Unglück, wenn man entdeckte, dass eine Fledermaus ihren Weg ins Haus gefunden hatte, uni das Haus herum oder durch ein Fenster ins Haus hineinflog, da dies auf den Tod eines seiner Bewohner hindeutete. Sah man Fledermäuse senkrecht nach oben und dann wieder zur Erde hinabfliegen, dann war auch das ein unheilvolles Zeichen: Es hiess, dass an diesem Ort bald die Hexen zusammenkämen. In manchen Teilen Europas trugen abergläubische Menschen einen Fledermausknochen bei sich; sie glaubten, das schütze sie vor dem bösen Zauber, den man mit diesem Tier verband. Ein Haus liess sich angeblich auch vor Hexerei schützen, wenn man eine lebendige Fledermaus dreimal rund uni das Gebäude herumtrug und dann ihren toten Körper neben ein Fenster oder an die Tür eines Schuppens nagelte.
Fledermäuse galten auch im überlieferten Hexenwissen als Zutat für allerlei Zaubertränke. Manche Rezepturen für Liebestränke oder Flugsalbe verlangten angeblich auch einige Tropfen Fledermausblut, damit eine Hexe, die einen Flug auf ihrem Besen antreten wollte, wie eine Fledermaus die Luft beherrschte und Zusammenstösse vermeiden konnte. Das Blut dieser Tiere mag auch beim Feiern der schwarzen Messe und beim Ziehen magischer Kreise verwendet worden sein. Dem Hexenwissen zufolge verlieh das Waschen des Gesichts mit Fledermausblut die Fähigkeit, im Dunkeln zu sehen.
Die Verwendung von Fledermäusen in einer Reihe von geheimen Riten hat sich bis in die heutige Zeit fortgesetzt: 1962 sahen sich die Behörden in New York genötigt, den Verkauf von „Voodoo-Drogen“, die Fledermausblut enthielten, zu verbieten. Obwohl sie eine relativ junge Erfindung des Kinos zu sein scheint, hat die moderne Vampir-Mythologie ebenfalls dafür gesorgt, die Assoziation von Fledermäusen mit schwarzer Magie zu vertiefen. In den älteren europäischen Sagen hat nie eine Verbindung zwischen der Fledermaus und dem Vampir-Mythos bestanden, und bei Bram Stoker, dem Verfasser der ursprünglichen Dracula-Geschichte, findet sich kein Argument für eine solche Verknüpfung.